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            熒光-PCR法中普通PCR和qPCR引物區別解析

            更新時間:2023-03-13點擊次數:549
               熒光-PCR法試劑盒具備高特異性,與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;檢測靈敏度可達10-100拷貝;該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;多種雙重PCR檢測及三重PCR檢測試劑盒。
              熒光-PCR法中的普通PCR和qPCR引物設計原則有哪些區別呢?
              一、二者的相同之處
              序列的查找是一致的;
              序列選取應在基因的保守區段;
              選取合適的擴增片段大小
              避免引物自身或與引物之間形成4個或4個以上連續配對;
              避免引物自身形成環狀發卡結構;
              Tm值在55-65℃,GC含量在40%-60%;
              引物之間的TM相差避免超過2℃;
              引物的3’端避免出現3個或3個以上連續相同的堿基。
              二、二者的不同之處
              qPCR產物長度PCR要求在300bp以內,一般先選80-150bp之間;多對目的基因同時擴增,文獻上查來的引物條件會不同,需要設計盡可能條件一致的引物;目的基因含量比較低時,需要設計靈敏度比較高的引物;相對電泳法,qPCR靈敏度比較高,對引物的要求更高,引物二聚體要少,熔解曲線要求單一產物;PCR的目的是進行定量或者相對定量,對擴增的效率有要求,對引物的二級結構要求高。
              普通PCR引物根據實驗的要求不同,長度一般是從150bp到幾千bp不等;對二級結構要求沒有qPCR高;對擴增效率要求不高;可選用梯度PCR儀,選擇不同退火溫度,對引物退火溫度要求不需要一致。

            TEL:021-61210612

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